P-糖蛋白（P-gp，编码基因为ABCB1）是ATP结合盒（ABC）转运蛋白家族的重要成员，广泛分布于生物屏障组织（如肝脏、肾脏、肠道和血脑屏障），通过转运药物至管腔侧维持屏障功能。在兽医领域，P-gp在药物代谢、排泄和药物-药物相互作用中具有关键作用，其功能异常或受到药物抑制可能导致毒性增加或耐药性发生。
目前针对P-gp的研究多集中于人类和犬科动物，关于猫P-gp的功能特性及药物抑制作用的研究仍然有限。本研究旨在利用猫淋巴瘤细胞建立P-gp功能模型，评估兽药对P-gp活性的影响，为兽药的安全性评价提供科学依据。
材料与方法
1. 模型构建
- 细胞系选择：采用来自猫FeLV阳性胸腺淋巴瘤的FT-1细胞及其多药耐药亚株FT-1/ADM（经过多代阿霉素诱导获得）。FT-1细胞无P-gp表达，而FT-1/ADM细胞具有高P-gp表达水平。
- 细胞培养：细胞在含RPMI-1640培养基（补充10%胎牛血清、青霉素/链霉素及谷氨酰胺）的条件下培养，每3天传代一次；FT-1/ADM细胞定期加入阿霉素以维持多药耐药表型。
- P-gp验证：通过qPCR检测FT-1/ADM细胞P-gp的高表达，同时确认FT-1细胞无P-gp表达。
2. 实验设计
- 荧光标记检测：以荧光染料罗丹明123（Rh123）为P-gp底物，测试P-gp对其外排活性的影响。实验设置以FT-1/ADM细胞为实验组，以FT-1细胞为对照组。
- 药物筛选：选取兽药中已知的P-gp抑制剂（PSC833、伊维菌素、环孢素和维拉帕米）以及其他常见药物（如酮康唑、伊曲康唑和地西泮）进行评估。
3. 荧光检测与数据分析
- 将细胞与Rh123和药物共同孵育30分钟后，通过流式细胞仪检测细胞内荧光强度。
- 抑制效果以细胞荧光相对强度表示，通过非线性回归拟合计算各药物的半数抑制浓度（IC50）。
结果
1. 模型验证
- FT-1/ADM细胞在无药物干预的条件下显示低罗丹明123吸收，表明P-gp活跃外排功能。
- 在加入PSC833（10 µM）后，FT-1/ADM细胞荧光强度显著增加，进一步验证模型的可靠性。
2. 药物抑制作用
- 强效抑制剂：
- PSC833和伊维菌素对P-gp活性具有显著抑制作用，其IC50值分别为2.09 µM和3.37 µM。
- 中效抑制剂：
- 环孢素对P-gp活性有中度抑制作用，但无法达到完全抑制（100%）。
- 维拉帕米仅在高浓度（≥0.4% DMSO）下表现出弱效抑制作用。
- 无显著作用药物：
- 酮康唑、伊曲康唑以及地西泮及其代谢物对P-gp活性无显著影响。
讨论
1. 模型的可靠性与适用性
本研究成功建立了基于猫淋巴瘤细胞的P-gp功能模型，结果表明该模型能够可靠地反映P-gp底物外排功能及其对抑制剂的敏感性。PSC833和伊维菌素作为高效P-gp抑制剂，其结果与其他物种的研究一致，进一步验证了模型的跨物种适用性。
2. 兽药与P-gp相互作用
- 伊维菌素作为一种常用驱虫药，对P-gp活性的强效抑制作用提示了潜在的药物相互作用风险，尤其在多药联合使用时需注意剂量控制。
- 环孢素和维拉帕米对P-gp的中效抑制作用可能对药物动力学产生一定影响，但较低的抑制效率表明其风险较低。
- 酮康唑及地西泮对P-gp无明显抑制作用，表明其在联合用药中的P-gp相关风险有限。
3. 模型局限性与改进方向
- 与犬类模型相比，猫模型的IC50值略高，可能与不同细胞系的基因背景或药物代谢能力相关。未来研究可通过原代细胞或体内实验进一步验证药物的抑制潜力。
- 除了抑制作用外，还需研究兽药对P-gp底物代谢的动态影响，以完善模型预测能力。
参考文献：
A functional model for feline P-glycoprotein