猫免疫缺陷病毒（FIV）因其与人类免疫缺陷病毒（HIV-1）在病理机制和疾病进程上的高度相似性，长期以来被用作研究慢病毒感染与免疫缺陷的理想动物模型。然而，由于FIV感染后的疾病进程通常较长且变化多样，这为其作为实验研究模型的实际应用带来了挑战。Diehl等人在1995年的研究中提出了一种创新的建模方法，通过急性期病毒传代来诱导FIV的快速发病，为慢病毒免疫缺陷疾病的研究提供了更高效且可靠的实验模型。以下从技术与实验操作的角度，详细探讨这一建模方法的核心步骤与要点。
1. 病毒株的制备与特性确认
该实验使用了一种从自然感染的FIV阳性猫体内分离的C亚型FIV病毒株（命名为CABCpadyOOC）。为确保病毒在实验中的高致病性，研究团队选择了急性期的病毒，而非经过长期体内或体外适应的株系。这一选择基于急性期病毒具有高复制能力且未经过宿主免疫系统的选择。
具体操作如下：
- 病毒采集：从急性期感染的猫体内采集血浆样本，随后通过逆转录定量PCR（QC-PCR）测定病毒滴度。
- 病毒纯化与确认：通过外周血单个核细胞（PBMC）培养及免疫学检测（如ELISA），确认样本中不含其他潜在的猫类逆转录病毒（如猫白血病病毒）。
2. 动物模型的选择与分组
实验动物为来自特定病原体清除（SPF）猫种群的8周、12周和16周龄健康幼猫。将实验猫分为不同组别，以研究年龄、病毒剂量及病毒来源对FIV疾病进程的影响。
- 年龄分组：研究中分别选择8周龄、12周龄和16周龄的猫，以评估年龄对FIV快速发病的影响。
- 对照组设置：每个实验组均设置未感染的健康对照组，用于评估感染对免疫细胞（如CD4+ T细胞）和器官（如胸腺、淋巴结）的影响。
3. 急性期病毒的传代感染
急性期病毒的传代是该建模方法的核心步骤，其目的是确保病毒在宿主体内的高复制力与免疫系统未经过适应性选择的状态。具体操作如下：
- 初代感染：选取一只8周龄SPF猫，通过静脉注射1毫升急性期病毒样本感染该猫。感染后的病毒滴度未进行稀释或选择，保证病毒的自然高致病性。
- 急性期血浆收集：在感染后的前8周，每周采集急性期血浆，并将其进行混合后制成高滴度病毒池。
- 病毒传代感染：通过静脉注射，将急性期病毒池分别感染不同组别的实验猫。其中，部分组别接种未经稀释的高浓度病毒株，部分组别接种逐级稀释的病毒样本，以评估病毒剂量对疾病进程的影响。
4. 临床观察与样本采集
感染后的实验动物在整个研究期间接受密切监测，并定期采集血液与组织样本进行分析。以下是主要技术操作与观察指标：
- 临床评估：每周检查并记录淋巴结肿大、体重下降、食欲丧失、腹泻、皮肤脓肿等症状。快速发病的猫通常会在感染后4至8周内发展至终末阶段。
- 血液样本分析：利用流式细胞术（Flow Cytometry）检测CD4+和CD8+ T细胞数量的动态变化。研究显示，快速进展型猫在感染早期（2周内）即出现显著的CD4+ T细胞减少。
- 组织样本检测：通过胸腺、淋巴结和脾脏等免疫器官的称重及组织切片观察，评估器官萎缩与淋巴细胞的耗竭情况。采用原位杂交技术（In Situ Hybridization）检测病毒在免疫器官中的复制情况。
5. 数据分析与模型验证
实验结果表明，通过急性期病毒传代感染，超过50%的实验猫在短时间内表现出快速的免疫缺陷症状，包括严重的CD4+ T细胞减少、胸腺萎缩和全身感染。这种快速进展型疾病模型高度类似于HIV-1终末期的免疫抑制状态。
进一步分析发现：
- 病毒剂量：高滴度病毒感染的实验猫更容易发展为快速进展型疾病。
- 年龄影响：8周龄幼猫对急性期病毒的感染更敏感，其发病率和死亡率均高于12周和16周龄猫。
6. 实验模型的优势与应用
急性期病毒传代感染显著加速了FIV疾病的进程，为慢病毒感染的病理机制与治疗研究提供了高效的模型体系。与传统的FIV模型相比，该方法的优点在于：
- 时间缩短：从感染到终末期仅需4至8周，大幅降低实验成本与时间。
- 高一致性：实验组间疾病进程的可重复性显著提高。
- 临床相关性：模型症状高度模拟HIV晚期患者的免疫缺陷特征。
结论
通过急性期病毒传代诱导加速FIV发病的建模方法，为研究慢病毒感染及免疫缺陷疾病提供了一种高效、可靠的小动物模型。未来，该模型可广泛应用于慢病毒疫苗与药物疗效评估，以及免疫系统病理机制的深入探索。
参考文献：
Induction of accelerated feline immunodeficiency virus disease by acute-phase virus passage