急性创伤模型是研究皮肤损伤修复和创伤治疗新策略的重要工具。猫因其独特的皮肤结构和愈合特点，是研究慢性创伤或皮肤修复的理想动物模型之一。本文将详细介绍一种可控、重复性高的猫急性创伤模型的建立方法，从实验设计、操作步骤到后续管理进行全面阐述。
一、实验设计与准备
1. 动物选择
- 种类和数量：选用健康的成年家猫，性别不限，体重范围为3-5 kg。
- 健康状态：动物需经过全面的体检（包括血常规、体温和心肺功能评估），确保无基础疾病。
- 伦理要求：所有操作需遵守动物实验伦理，获得相关机构的伦理批准。
2. 实验前准备
- 环境适应：实验前将猫单独饲养至少7天，使其适应实验环境，避免应激反应。
- 术前禁食：术前禁食12小时，但允许自由饮水，以降低麻醉期间呕吐和误吸的风险。
- 手术设备：
- 消毒手术台
- 无菌剪刀、镊子和针线
- 创伤模板（圆形或矩形）
- 消毒剂（碘伏、酒精）和无菌纱布
3. 模型目标
该模型通过在猫背部制造标准化的全层皮肤切除创口，用于研究急性创伤的愈合过程、组织反应以及新型治疗材料的效果。
二、模型建立步骤
1. 麻醉与固定
- 麻醉诱导：采用氯胺酮（10-15 mg/kg）和地西泮（0.5 mg/kg）联合麻醉，静脉注射。
- 麻醉维持：插管后使用异氟烷（1.5%-2.5%）进行吸入麻醉，同时监测心率、呼吸和血氧饱和度。
- 固定体位：将猫背部朝上固定于手术台，用柔软的带子固定四肢以防意外移动。
2. 创伤区域准备
- 区域选择：选取背部区域，避免脊椎和关节部位。此区域活动较少，便于观察愈合过程。
- 皮肤处理：剃除背部毛发，清理皮肤后用碘伏和酒精消毒。
3. 创伤的制作
- 模板使用：
- 使用直径为15 mm的圆形不锈钢模板或标准化矩形模板在皮肤表面标记创伤区域。
- 确保模板间距适当（例如，每个创口间隔25 mm以上），以避免创伤间的相互干扰。
- 皮肤切除：
- 使用无菌手术刀或皮肤打孔器切除标记区域的全层皮肤，直至暴露皮下组织。
- 避免损伤深层肌肉或血管，以保持创伤的标准化。
4. 创伤处理
- 无缝合处理：创口不进行缝合，以模拟开放性伤口，便于研究愈合过程。
- 覆盖材料：根据实验设计，可选择不同材料覆盖伤口：
- 自体富血小板纤维蛋白（PRF）
- 商用敷料（如麦卢卡蜂蜜、羧甲基纤维素敷料）
- 单纯纱布覆盖作为对照。
三、术后管理与观察
1. 疼痛管理
术后使用非甾体类抗炎药（如美洛昔康，0.2 mg/kg）或布托啡诺（0.2 mg/kg）进行镇痛，连续用药3天。
2. 抗感染处理
- 抗生素预防：术后使用阿莫西林或恩诺沙星注射，连续3天，防止感染。
- 每日护理：检查创口是否有渗出物、红肿或异味，必要时更换敷料。
3. 动物状态监测
- 全身状态：每日记录体温、饮食和行为活动情况。
- 创口变化：通过拍照记录创伤面积变化，评估愈合进程。
四、数据采集与分析
1. 伤口愈合率
- 使用数字化工具测量伤口面积，计算愈合率： 愈合率=初始创伤面积 – 未愈合面积初始创伤面积×100%愈合率 = \frac{\text{初始创伤面积 – 未愈合面积}}{\text{初始创伤面积}} \times 100\%愈合率=初始创伤面积初始创伤面积 – 未愈合面积×100%
2. 组织学分析
- 样本采集：术后第7、14、21天取创伤组织进行病理分析。
- 染色方法：
- H&E染色：评估炎症细胞浸润和组织结构变化。
- Masson三色染色：检测胶原纤维生成及排列情况。
- Ki-67免疫组化：评估细胞增殖水平。
3. 分子生物学分析
- 炎症因子检测：使用ELISA检测创口组织中TNF-α、IL-1β等炎症因子的水平。
- 生长因子检测：qPCR检测TGF-β1、VEGF等愈合相关基因的表达变化。
五、模型的特点与应用
1. 优势
- 标准化创伤：模板化切除方法确保创伤形状和深度一致，提高实验可重复性。
- 生理相关性：猫皮肤的解剖结构和愈合特点与实际临床更为接近。
- 广泛适用性：可用于评估不同治疗策略（药物、敷料、细胞疗法）的效果。
2. 局限性
- 个体差异：猫的创伤愈合速度可能因年龄、体重和健康状态而有所差异。
- 创伤控制：全层皮肤切除需严格操作，以避免过深或过浅引起模型偏差。
六、结论
猫急性创伤模型是一种可靠的实验工具，通过标准化的创伤制作方法和严密的术后管理，能够真实再现皮肤损伤的愈合过程。结合组织学和分子生物学技术，该模型为创伤愈合机制的研究以及新型治疗方法的开发提供了理想的平台。未来研究可进一步优化模型细节，并探索更多临床相关的治疗方案。
参考文献：
Autologous platelet-rich fibrin enhances skin wound healing in a feline trauma model