猫疱疹病毒-1（Feline Herpesvirus-1, FHV-1）是引起猫眼部感染的主要病原体，常导致结膜炎、角膜溃疡和眼睑炎等疾病。这种病毒的研究不仅对于猫的临床医学意义重大，同时由于其与人类单纯疱疹病毒（HSV）在感染机制和病理表现上的相似性，也具有重要的转化医学价值。在实验研究中，FHV-1感染模型为研究抗病毒治疗提供了重要工具。以下将从技术和实验操作角度，详细介绍如何建立这一模型。
1. 动物选择与前期准备
1.1 动物筛选
- 实验动物：实验选用3个月大的家养短毛猫，确保实验个体的健康状态，且未接种FHV-1疫苗。
- 病原体检测：所有实验动物需经过病原检测，确保其为特定病原体阴性，包括FHV-1、猫白血病病毒（FeLV）和猫免疫缺陷病毒（FIV）。
1.2 动物隔离与适应
- 在实验前4周将猫单独隔离饲养，以避免交叉感染，同时使其适应实验环境。隔离区需严格控制生物安全条件，进入隔离区的人员需穿戴隔离服、手套、口罩及鞋套。
2. 病毒制备与感染方案
2.1 病毒制备
- 病毒株选择：实验中常使用FHV-1的标准毒株（如FH2CS23），具有高度感染性。
- 病毒培养：在Crandell-Rees猫肾细胞（CRFK）中培养FHV-1，收集上清液并测定病毒滴度，确保实验用病毒的滴度为10^6 PFU/mL。
2.2 病毒储存与运输
- 病毒在-80°C条件下储存，实验前在4°C条件下解冻并立即使用，确保病毒活性。
3. 感染方法
3.1 病毒接种
- 接种途径：通过滴眼法将病毒接种至猫眼结膜囊。
- 操作步骤：
- 用无菌的移液器吸取0.1 mL病毒溶液；
- 分别滴入每只眼的下眼结膜囊；
- 用手轻轻闭合猫的眼睑，持续1分钟，确保病毒与结膜表面的充分接触。
3.2 感染监控
- 感染后，需每日观察猫的行为和眼部状况，记录潜在的不良反应，如过度流泪、食欲不振等。
4. 感染后的症状评估
4.1 临床症状评分
- 使用标准化的眼表临床评分系统，每2天记录结膜充血、眼睑痉挛、分泌物及角膜溃疡的严重程度（0=无，1=轻度，2=中度，3=重度）。
- 计算每日总分，范围为0至15分。
4.2 眼部病理检测
- 活体共聚焦显微镜：在感染后第10天检测角膜白细胞浸润水平，量化炎症程度。
- 荧光素染色：用于评估角膜溃疡面积和分布。
5. 病毒学分析
5.1 样本采集
- 每3天用无菌聚酯棉签采集眼结膜拭子样本，用于后续病毒分离和核酸检测。
- 样本采集后立即放置在含有病毒运输介质的无菌管中，并保持4°C保存，确保病毒稳定性。
5.2 病毒分离
- 采用CRFK细胞系进行病毒培养，利用空斑形成单位（PFU）测定病毒滴度。
5.3 qPCR分析
- 提取病毒核酸，使用特异性引物针对FHV-1的US7基因进行实时荧光定量PCR，测定病毒基因组拷贝数。
6. 动物护理与伦理考虑
6.1 动物福利
- 在感染诱导和实验期间，应为实验动物提供良好的环境和适当的护理，包括饮食供应、健康监测和必要的镇痛处理。
6.2 动物处置
- 实验结束后，应根据伦理要求和研究方案对动物进行妥善安置，例如安排领养或安乐死。
结论
通过严格控制实验条件、标准化感染方法以及细致的临床和病毒学评估，实验性猫FHV-1感染模型能够有效模拟自然感染，为研究抗病毒治疗策略提供可靠的平台。这一模型的建立不仅推动了兽医眼科疾病的研究，也为人类单纯疱疹病毒的治疗提供了宝贵的转化研究工具。
参考文献：
Comparative Efficacy of Topical Ophthalmic Ganciclovirand Oral Famciclovir in Cats with Experimental Ocular FelineHerpesvirus-1 Epithelial Infection