视网膜静脉阻塞（Retinal Vein Occlusion, RVO）是临床上常见的视网膜血管疾病，其发病机制复杂，治疗手段有限。为深入研究RVO的病理变化及潜在治疗策略，建立高效且可靠的动物模型尤为重要。猫的眼解剖结构与人类相似，特别是视网膜血管系统，使其成为理想的研究模型。本文详细介绍了如何通过激光光凝诱导猫RVO模型，包括实验设计、操作步骤及注意事项。
1. 实验准备
1.1 动物选择
- 实验对象：选择健康的成年欧洲短毛猫，体重2.3-3.6千克。确保实验动物无系统性疾病和眼部病变。
- 伦理审批：实验需获得动物伦理委员会批准，所有操作均需符合动物福利规范。
1.2 仪器与设备
- 激光设备：氩绿色激光仪（波长532 nm）。
- 光学相干断层扫描（Optical Coherence Tomography, OCT）和OCT血管成像（OCTA）设备，用于模型建立后的影像验证。
- 手术显微镜和眼科手术工具，用于操作的精确定位。
- 生理监测设备，包括心率、血氧饱和度和血压监测仪。
1.3 动物准备
- 麻醉：使用氯胺酮（2.0 mg/kg）和甲苯噻嗪（0.2 mg/kg）肌肉注射进行麻醉诱导，随后气管插管并用1.5%-2.0%异氟醚维持麻醉。全程监测心率、血氧饱和度和呼吸情况。
- 眼部准备：使用0.5%盐酸丙卡因滴眼液进行表面麻醉，并用2.5%苯肾上腺素滴眼液扩瞳。术前清洁眼睑和眼表，确保无感染风险。
2. 模型建立步骤
2.1 激光光凝
- 目标血管选择：通过显微镜观察，选择视网膜分支静脉（Branch Retinal Vein, BRV）作为光凝目标，避免损伤动脉。目标血管应靠近视盘区域，以确保血流阻塞后对视网膜血供的显著影响。
- 激光参数设置：
- 光斑直径：200 μm。
- 激光持续时间：0.2秒。
- 激光功率：300-500 mW（根据动物个体差异调整，以确保有效阻塞而不造成过度组织损伤）。
- 光凝操作：
- 在显微镜下，将激光聚焦于目标静脉上。
- 每个光凝点施加20-30次激光，确保血管闭合。可通过观察静脉内的血流停止来确认阻塞成功。
- 如果一次光凝未能完全阻塞，可增加激光剂量或补充光凝点，但需避免过度损伤周围组织。
2.2 阻塞验证
- 实时监测：在光凝过程中，通过OCTA监测阻塞区域的血流变化，确认血流停止及微血管结构改变。
- 初步影像记录：使用OCT记录光凝区域的视网膜厚度和结构，以评估光凝后的组织反应。
3. 模型验证与随访
3.1 血流动力学评估
- 在光凝后即时、1天、4天、7天和14天进行DOCT检查，测量目标区域动脉和静脉的血流速度（V）、血流量（RBF）及血管直径（D）。
- 比较光凝前（基线值）和光凝后各时间点的数据变化，确认阻塞的持续性及血流恢复情况。
3.2 微血管成像
- 通过OCTA观察光凝区域及周围微血管网的重塑情况，包括毛细血管无灌注区域、旁路血管形成及血管直径变化。
- 使用3 × 3 mm和12 × 12 mm扫描范围，分别记录浅层和深层视网膜血管结构的动态变化。
3.3 视网膜厚度与炎症评估
- 定期使用OCT测量光凝区域及周边视网膜厚度，评估水肿的发生和消退趋势。
- 结合组织病理学观察炎症细胞浸润及纤维化情况。
模型的优势与应用
5.1 建立模型的优势
- 猫的视网膜解剖结构与人类高度相似，使得该模型能够更准确地模拟RVO的发病机制及病理变化。
- 利用激光光凝技术可精准控制阻塞区域及程度，方便重复实验和对比研究。
5.2 应用前景
- 该模型可用于研究RVO的血流动力学变化、视网膜微血管重塑及旁路血管形成机制。
- 通过结合不同治疗手段（如抗VEGF药物、血管保护剂）评估其对RVO病理过程的干预效果，为临床治疗提供依据。
参考文献：
Longitudinal Changes in Retinal Blood Flow in a Feline Retinal Vein Occlusion Model as Measured by Doppler Optical Coherence Tomography and Optical Coherence Tomography Angiography