猫嗜酸性角膜炎（Feline Eosinophilic Keratitis, FEK）是一种慢性、进展性角膜疾病，特征是角膜和结膜的炎性浸润，常伴随新生血管和白色-黄色斑块形成。这种疾病的病因尚未完全明确，但通常认为是一种对未知抗原刺激的免疫介导反应，可能涉及Ⅰ型或Ⅳ型过敏反应，并与猫疱疹病毒（FHV-1）感染相关。当前治疗主要依赖局部使用糖皮质激素或免疫抑制药物（如环孢素A），但疗效有限且易复发，同时长期使用可能引发显著的副作用。
脂肪来源间充质干细胞（Adipose-derived Mesenchymal Stromal Cells, Ad-MSCs）以其免疫调节和抗炎特性被广泛研究，并被证明在多种炎症性疾病中具有良好的治疗潜力。本文首次评估了异体猫脂肪来源间充质干细胞（fAd-MSCs）通过结膜下注射治疗顽固性FEK的安全性与疗效。
研究方法
1. 实验设计与动物选择
- 实验对象：招募了5只家养欧洲短毛猫，年龄3至6岁，体重3.2至4.1千克，均诊断为顽固性FEK，病程为6至12个月。每只猫仅一只眼受到影响，右眼和左眼分别占60%和40%。
- 治疗前状态：所有猫在治疗前均接受过传统疗法（如糖皮质激素、环孢素A和抗生素），但均疗效不佳或出现不良反应，并在治疗前2周停用所有药物。
2. 干细胞制备与特性分析
- 细胞分离与培养：
- 从一只健康供体猫的腹部脂肪组织中提取fAd-MSCs。脂肪组织在无菌条件下用胶原酶Ⅱ消化，分离后的细胞悬液培养于含10%胎牛血清的培养基中，进行扩增和传代。
- 干细胞在传代2时被用作注射细胞，确保细胞的增殖能力和基因组稳定性，同时避免多次传代导致的老化和染色体异常。
- 细胞表型与分化能力：
- 使用流式细胞术检测细胞表型，fAd-MSCs呈现典型的间充质干细胞标志物阳性（CD29、CD44、CD73、CD90），同时不表达造血标志物（CD34、CD45）。
- 细胞的多向分化能力通过诱导分化实验得到验证，包括向脂肪、软骨和骨细胞的分化。
3. 治疗与随访
- 治疗方案：每只猫在受影响眼部结膜下注射两次fAd-MSCs（每次2×10⁶细胞，注射间隔2个月）。注射前对细胞活性进行评估，确保其存活率和功能。
- 随访评估：
- 在治疗后1、3、6和11个月对所有猫进行临床检查，包括裂隙灯显微镜检查、Schirmer泪液试验（STT）、细胞学检查和生化血液分析。
- 记录角膜病变（如斑块、血管增生和结膜充血）的变化，以及嗜酸性粒细胞和肥大细胞的数量变化。
研究结果
1. 细胞制备与特性
- 从供体猫脂肪组织中成功分离并培养出fAd-MSCs，这些细胞在体外表现出良好的增殖能力和典型的间充质细胞表型，能够分化为脂肪、软骨和骨组织细胞。流式细胞术和形态学观察进一步验证了其特性和多向分化潜力。
2. 治疗效果
- 临床改善：
- 治疗后所有猫均表现出显著的临床症状改善。在治疗后2个月内，大多数猫的角膜斑块和新生血管显著减少；到6个月时，所有猫的临床症状完全缓解。
- 在治疗后11个月随访中，所有猫均未出现病情复发，受影响眼的角膜恢复透明，无任何血管增生或炎症迹象。
- 细胞学检查：
- 治疗前，所有猫的角膜细胞学均显示大量嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润；治疗后，这些炎症细胞完全消失。
3. 安全性评估
- 在整个实验期间，未观察到任何局部或系统性不良反应，包括注射部位感染、全身炎症或血液生化参数异常。所有猫均耐受良好，未出现与治疗相关的急性或慢性并发症。
讨论
1. 免疫调节与抗炎机制
fAd-MSCs通过多种机制发挥免疫调节作用，包括抑制T细胞和B细胞活化、促进调节性T细胞的生成以及分泌多种抗炎因子（如TGF-β、IL-10和PGE2）。这些机制可能解释了其在抑制嗜酸性粒细胞和肥大细胞介导的炎症中的有效性。此外，fAd-MSCs还能通过调节血管生成相关因子（如上调抗血管生成因子TSP-1，抑制促血管生成因子MMP-2）减少新生血管的形成。
2. 与传统疗法的比较
传统治疗（如糖皮质激素和环孢素A）虽然能够控制部分症状，但常因复发率高或副作用显著而限制其应用。而fAd-MSCs注射是一种安全且无药物依赖性的疗法，其免疫调节作用能够持久改善症状，减少病情复发，提高动物的生活质量。
3. 临床意义与研究展望
本研究首次证实了fAd-MSCs在治疗FEK中的安全性与有效性，为探索慢性免疫介导性角膜疾病的干细胞治疗提供了新思路。然而，研究样本量较小且缺乏对照组，未来需通过大规模对照研究进一步验证这些结果，并探讨其在人类疾病治疗中的潜在应用价值。
结论
异体fAd-MSCs结膜下注射是一种安全、有效且简单的FEK治疗方法。本研究展示了该疗法在改善角膜病变和减少炎症反应方面的显著效果，且疗效能够维持至少11个月。这一研究为基于干细胞的眼科疾病治疗开辟了新途径，也为进一步研究其机制和广泛应用奠定了基础。
参考文献：
Safety and efficacy of the mesenchymal stem cell in feline eosinophilic keratitis treatment