猫注射部位肉瘤是一种与疫苗接种相关的软组织肿瘤，发病率明显高于非注射部位肉瘤。这类肿瘤表现出强侵袭性、生长快速且易复发，即便采取包括手术和放疗的综合治疗手段，大部分肿瘤患者仍在1-2年内复发或死亡。
ISS 的病理生理学机制尚不完全清楚，但近年来研究表明，PDGFR 信号通路可能在肿瘤的发生和进展中起到重要作用。PDGFR 的异常激活可通过受体自磷酸化及下游信号级联反应，促进肿瘤细胞的增殖和存活。人类抗癌药物 Imatinib（另一种酪氨酸激酶抑制剂）在体外研究中被证明可以抑制 ISS 细胞生长，但其高昂的成本限制了其在兽医临床中的应用。
Masitinib 是一种选择性 PDGFR 抑制剂，已获批用于治疗犬肥大细胞瘤，并表现出良好的安全性和生物利用度。本研究旨在探讨 Masitinib 对猫 ISS 细胞的抗肿瘤作用，以及其在治疗 ISS 方面的潜在应用价值。
实验方法
1. 细胞系的建立与培养
研究使用了两种 ISS 细胞系：
- JB：来源于猫 ISS 原发性肿瘤。
- JBLM：来源于同一患者的 ISS 肺转移肿瘤。
细胞在含有 10% 胎牛血清的培养基中培养至融合状态后，分别用于后续实验。PDGFR 的表达通过 Western blot 进行了验证。
2. 药物处理
Masitinib 以浓度梯度加入培养基，实验组包括 PDGFR 激动剂 PDGF 刺激和未刺激两种条件，分析其对细胞增殖、存活及 PDGFR 磷酸化的影响。
3. 检测手段
- 细胞增殖：通过 Alamar Blue 法检测 Masitinib 对细胞增殖的抑制作用。
- 细胞凋亡：通过 7-AAD 染色结合流式细胞术评估细胞凋亡比例。
- PDGFR 磷酸化检测：利用免疫沉淀结合 Western blot 检测 Masitinib 对 PDGFR 自磷酸化的抑制作用。
研究结果
1. Masitinib 抑制 ISS 细胞增殖
Masitinib 对 JB 和 JBLM 细胞系的增殖均呈现剂量依赖性抑制作用。在未添加 PDGF 的条件下，IC50 值分别为 8.6 μM 和 8.4 μM，而在 PDGF 刺激下，IC50 值略升至 9.0 μM。这表明 Masitinib 可有效抑制 ISS 细胞的增殖，但需较高浓度。
2. Masitinib 诱导细胞凋亡
流式细胞术结果显示，Masitinib 可显著诱导细胞凋亡。在 8.6 μM、27.6 μM 和 86.2 μM 的药物浓度下，JB 和 JBLM 细胞的凋亡率分别为 40%、60% 和 95%。这种凋亡效应同样表现为剂量依赖性。
3. Masitinib 抑制 PDGFR 磷酸化
Western blot 显示，JB 和 JBLM 细胞均表达 PDGFR，而 PDGF 可显著诱导其磷酸化。Masitinib 在低至 0.4 μM 的浓度下即可部分抑制 PDGFR 的自磷酸化，1.4 μM 时几乎完全抑制。这表明 Masitinib 对 PDGFR 信号通路具有较强的靶向性。
讨论
本研究表明，Masitinib 能显著抑制 ISS 细胞的增殖，并通过抑制 PDGFR 的自磷酸化促进细胞凋亡。虽然在体外实验中所需的药物浓度较高，但仍为 ISS 的治疗提供了新的可能性。以下几点值得进一步探讨：
- 药物浓度与体内效果的关系
体内药代动力学研究显示，猫口服 Masitinib 后的血药浓度峰值约为 1 μM，低于体外实验所需的 IC50 浓度。然而，体内免疫反应及其他因素可能放大药物效应，需通过动物模型进一步验证。 - 与传统治疗的联合应用
Masitinib 与放疗、化疗药物的联合应用可能提高治疗效果。例如，Imatinib 已被证明可增强化疗药物对 ISS 的敏感性，Masitinib 是否具有类似作用值得研究。 - 不同细胞系的敏感性差异
研究中使用的细胞系来源于高度侵袭性的转移性肿瘤，可能对药物具有更强的耐药性。因此，进一步探索其他 ISS 细胞系的反应，尤其是原发性肿瘤细胞的敏感性，具有重要意义。
结论
Masitinib 通过抑制 PDGFR 信号通路，在体外实验中表现出良好的抗增殖和促凋亡作用，提示其可能成为猫 ISS 的潜在治疗药物。未来研究应着重于其在体内的效果验证，以及与标准治疗手段的协同作用。
参考文献：
Masitinib demonstrates anti-proliferative and pro-apoptotic activity in primary and metastatic feline injection-site sarcoma cells*