视网膜脱离是导致视力丧失的主要原因之一，其核心病理为光感受器从视网膜色素上皮分离，进而引发光感受器凋亡。在实验研究中，建立稳定的动物模型能够为探索疾病机制和治疗手段提供关键支持。猫因其视网膜解剖结构与人类相似，被广泛用于眼科疾病的研究。
本实验选用猫作为大型动物模型，利用腺相关病毒（AAV）递送 X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因，并通过气泡注射诱导局灶性视网膜脱离。这一方法旨在研究视网膜脱离后光感受器的结构和功能保护效果。
模型建立的具体方法
1. 基因递送：视网膜下注射
（1）动物选择与分组
- 实验对象：12只健康成年野生型猫（Felis catus）。
- 分组方案：实验组注射 XIAP 基因载体（AAV8.RK.XIAP），对照组注射 GFP 基因载体（AAV8.RK.GFP）。
（2）注射工具与技术
- 设备准备：20G 三通道晶状体切除仪和 25G 玻璃体切除仪，用于清除玻璃体以便于后续精准操作。
- 操作步骤：
- 采用三通道晶状体切除术（20G）和玻璃体切除术（25G），创造安全的操作空间。
- 使用显微注射系统将 AAV8 载体（AAV8.RK.XIAP 或 AAV8.RK.GFP）精确注射到视网膜下空间，注射位置位于视神经附近的上极区域。
（3）注意事项
- 确保注射时针头进入视网膜下腔，避免损伤视网膜或产生意外穿刺。
- 注射量控制在 100 µL 内，以减少过多注射液对视网膜的机械损伤。
2. 视网膜脱离的诱导
（1）脱离方法
- 在基因治疗注射完成 3 周后，通过气泡注射诱导局灶性视网膜脱离。
- 具体操作：使用 C3F8（八氟丙烷）气体注射至同一区域的视网膜下空间，气泡将视网膜推离色素上皮，形成局灶性脱离。
（2）技术要求
- 注射量：确保注入的气泡量适中，足以形成稳定的脱离区域，但不导致全视网膜脱离。
- 操作精度：注射位置与基因递送的区域一致，以便研究 XIAP 基因治疗在视网膜脱离区域内的保护效果。
3. 脱离复位的监测与评估
（1）复位监测：光学相干断层扫描（OCT）
- 监测周期：每 3 周使用 OCT 检查视网膜结构变化，记录气泡的吸收情况及视网膜复位过程。
- 目标：确保视网膜在 6 周内自然复位。
（2）功能评估：全场闪光视网膜电图（ERG）
- 操作方法：使用标准 ERG 测试装置检测光感受器对光刺激的电生理反应。
- 数据分析：对比脱离前后的视网膜功能，评估 XIAP 基因治疗对光感受器功能的保护作用。
（3）终末评估：组织学与免疫组化分析
- 取材时间：在视网膜脱离 9 周后取出实验眼进行组织学分析。
- 分析内容：观察视网膜光感受器层厚度变化，并通过免疫组化检测 XIAP 基因的表达位置与感染效率。
参考文献：
X-Linked Inhibitor of Apoptosis Gene Therapy Protects Retinal Structure in a Feline Model of Retinal Detachment