骨盆炎性疾病（Pelvic Inflammatory Disease, PID）是育龄女性中常见的生殖道感染疾病，通常由病原体向上感染至子宫、输卵管甚至腹腔引起。PID的研究面临着实验模型的局限性，而猫因其生殖系统的解剖结构和生理特性与人类相似，逐渐成为研究PID，尤其是衣原体感染相关机制的理想模型。本文从技术和实验操作的角度，详细阐述如何建立基于猫的衣原体骨盆感染模型。
实验前的准备
1. 实验动物选择
- 品种：选用英国短毛猫或其他合适的实验室猫种。
- 年龄与体重：选择9个月至2岁的成年健康猫，体重在1.5~2.9千克之间。
- 健康状况筛查：实验前需对猫进行全身体检，包括血液和尿液检测，确保其健康无潜在疾病。
2. 病原体制备
- 病原菌种：猫结膜炎衣原体（Chlamydia psittaci，FKC因子）。
- 培养与扩增：通过细胞培养和胚胎鸡卵黄囊扩增获得高浓度衣原体悬浮液，病原体浓度可达100×10⁹ CFU/mL。制备后将接种液储存在-70℃条件下备用。
- 接种液准备：实验前将冻存的衣原体接种液解冻，并调整至适合实验的体积（约0.1毫升/次）。
3. 实验设备与环境
- 麻醉设备：使用全身麻醉设备（如异氟烷麻醉机）确保动物在实验过程中的稳定。
- 手术器械：包括腹腔镜、长针（20号针头）、细胞刷等，用于输卵管注射及样本采集。
- 无菌操作环境：确保实验环境的清洁和手术操作的无菌条件。
实验操作步骤
1. 动物麻醉与固定
- 麻醉方法：使用氯胺酮（10~15 mg/kg）联合异氟烷全身麻醉，使猫进入深度麻醉状态以减少疼痛及应激反应。
- 固定姿势：将猫仰卧放置在手术台上，用柔软的固定带固定四肢，暴露背部和输卵管区域以便于手术操作。
2. 手术部位准备
- 剃毛与消毒：剃除腹部及腰部的毛发，使用75%的酒精和0.5%碘伏反复消毒手术区域，确保无菌操作。
3. 输卵管注射
- 定位输卵管：使用腹腔镜确定输卵管的位置。通过观察解剖标志（如输卵管伞端和宫角），确保操作精准。
- 病原体注射：
- 使用20号长针，将约0.1毫升高浓度衣原体接种液缓慢注射到输卵管内。
- 注射过程中避免针头刺破输卵管壁，同时确保接种液均匀分布。
- 注射后，用生理盐水冲洗针头以减少感染扩散风险。
模型验证与观察
1. 感染的临床表现
- 在感染后的3~4天内，实验猫可能表现出轻微的嗜睡、食欲下降和体重减轻。通常这些症状会在第6天自行缓解。
- 注意观察猫的精神状态、进食情况及局部感染的表现。
2. 输卵管病理变化
- 急性炎症期（4~13天）：输卵管组织表现为血管扩张、上皮细胞脱落和多形核白细胞（PMN）浸润，伴随组织腔内渗出物形成。
- 慢性炎症期（20天以上）：病变区域出现单核细胞浸润、纤毛损伤，以及输卵管伞端的纤维化和粘连。
3. 衣原体的分离与检测
- 病原体分离：在感染后的4~51天内，可从输卵管组织分离活衣原体。
- 血清抗体检测：感染12天后，可检测到针对FKC因子的抗体，其滴度在50天内保持稳定。
4. 组织学与细胞学分析
- 组织学检测：取输卵管组织样本，进行HE染色和免疫组化分析，观察白细胞浸润、上皮细胞脱落及衣原体包涵体的存在。
- 细胞学检测：采用细胞刷采集输卵管上皮细胞涂片，观察细胞形态变化和炎症反应。
参考文献：
Chlamydial pelvic infection in cats: a model for the study of human pelvic inflammatory disease.