猫作为伴侣动物，其胃肠道健康对其生活质量至关重要。Campylobacter jejuni 是一种常见的病原菌，可导致猫腹泻及肠炎，尤其对幼猫的健康构成严重威胁。为研究 C. jejuni 感染引起的病理生理变化并评估新型治疗策略（如鸡蛋黄抗体 IgY）的效果，建立可靠的猫腹泻模型显得尤为重要。本模型基于布偶猫，通过标准化的感染步骤和操作流程，成功模拟了 C. jejuni 感染引起的腹泻，为后续治疗研究提供了重要工具。以下从实验设计、操作步骤及关键技术点详细阐述建模方法。
1. 模型设计与动物选择
- 实验动物选择：
- 使用12只健康的布偶猫，年龄为4个月，体重为2.5至3.5千克。布偶猫因其肠道微生物群与感染响应模式较为一致，常用于胃肠道研究。
- 实验前确保所有猫处于健康状态，体检无异常，粪便常规检查无病原菌感染。
- 分组设计：
- 感染组（C.j组）：通过接种 C. jejuni 引发感染并接受PBS灌胃作为对照（n=6）。
- 感染+治疗组（C.j+IgY组）：感染后接受鸡蛋黄抗体 IgY 灌胃治疗（n=6）。
- 伦理要求：
实验设计需经动物伦理委员会批准，严格遵守动物福利与实验伦理。
2. 病原制备与接种
- 病原菌制备：
- 从自然感染 C. jejuni 的猫粪便中分离病原菌，通过生化实验和16S rDNA测序对其鉴定。
- 接种于改良CCDA培养基（Charcoal-Cefoperazone-Deoxycholate Agar），在微氧环境（5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂）下培养48小时。
- 收集生长良好的菌落，以生理盐水调整菌悬液浓度至1×10⁹ CFU/mL，用于感染实验。
- 接种方法：
- 预处理：实验前12小时禁食，以减少胃内容物对病原菌的干扰。
- 接种方式：通过胃管灌胃，每只猫接种1 mL C. jejuni 菌悬液（1×10⁹ CFU/mL）。灌胃后轻轻按摩猫腹部以确保菌液均匀分布。
- 感染周期：感染后密切观察14天。
3. 临床指标评估
- 临床症状监测：
- 体重变化：记录感染前及感染后每日体重，用以评估感染对动物全身健康的影响。
- 粪便评分：根据以下标准对猫的粪便进行评分（0-3分）：
- 0分：成型粪便，正常形态。
- 1分：略软但成型。
- 2分：半液体状粪便，无完全成型结构。
- 3分：水样腹泻。
- 腹泻发生率：统计感染后第1-14天内出现腹泻（粪便评分≥2）的天数及动物比例。
4. 实验样本采集
- 粪便采集：每日收集每只猫的新鲜粪便，用于细菌定量分析及短链脂肪酸（SCFAs）检测。
- 血样采集：感染前和感染后第3天、第7天和第14天取静脉血样，离心后收集血清，用于检测全身炎症标志物（如IL-6、TNF-α和CRP）。
- 肠组织采样：实验结束后，通过安乐死获得回肠和结肠组织，评估肠道组织学改变及局部炎症水平。
5. 数据分析
- 细菌负载测定：
使用实时荧光定量PCR（qPCR）检测粪便样本中 C. jejuni 的DNA含量，作为感染水平的指标。 - 炎症因子分析：
通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清和组织中的IL-6、TNF-α和CRP水平，以评估全身及局部炎症反应。 - 肠道代谢分析：
使用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析粪便中的短链脂肪酸浓度（如乙酸、丙酸和丁酸），评估感染对肠道代谢的影响。
参考文献：
Protective effect of chicken yolk antibody Y against Campylobacter jejuni induced diarrhea in cats